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贴壁细胞爬片有哪些规格?

发布时间:2020-09-09

【爬片的准备】

1. 爬片:
24*24盖玻片,刚好用于6孔板。也可用更大的盖玻片,放在大的培养皿中爬片。

2. 盖玻片泡酸过夜,第二天先用自来水冲洗20遍,再置于无水酒清中浸泡6小时,再用三
蒸水冲洗3遍(个人认为主要目的是将酸冲洗干净就可以了,如果不干净的话,细胞帖壁不
好),放在饭盒或者玻璃培养皿中烘干后进行高压消毒、烤干。

3.盖玻片浸泡75%乙醇10分钟消毒,然后酒精灯上烤干,直接放入培养皿,开始种细胞。重点是玻片是干净的、无菌的。

4.盖玻片在液体中经常有贴壁吸附力,用一般镊子很难一次性夹起,将注射器针头针尖
向背面弄个小钩,这样将爬片轻轻勾起,用小镊子取出就可以。

【细胞爬片】

1. 胰酶消化细胞后计数重悬细胞于完全培养基中。

2. 加细胞时,根据玻片的大小,先在每个孔里准备放爬片的位置滴少量培养基,目的是使
玻片与培养皿靠培养基的张力粘合到一起,然后放玻片,防止加细胞悬液时玻片漂起,造成双层细胞贴片。整个过程注意无菌操作。

3. 根据自己的需要选择合适的细胞密度种入培养板内即可

4. 按照实验设计,作用一定时间后取玻片。注意细胞不能太密,否则容易掉片。

【细胞爬片的固定】

1. 细胞爬片取出后,PBS洗2遍。但比如做凋亡的TUNEL染色时就避免洗,因为凋亡的
细胞在洗的过程中有可能会脱落。

2.常用的固定液
1.) 冷丙酮,可用于一般的免疫组化染色。将纯的丙酮预先放入冰箱-20℃后便为冷丙酮,加入冷丙酮于-20℃(丙酮有很强的挥发性,注意将含有丙酮和爬片的器皿盖严,防止其挥发)固定10分钟。取出后,室温吹干,然后放入-20℃保存。

2. )多聚甲醛(常用4%):可用于免疫电镜;也可用于免疫荧光以及TUNEL染色。主要检测组织内一些性能娇弱的抗原特别是细胞表面抗原,例如各类淋巴细胸分化决定簇(CD)、主要组织相容性抗原等室温固定15分钟后,将表面液体吹干,入-20℃保存
3.) 95%乙醇,可用于免疫组化。
优点:穿透性强、抗原性保存较好。
缺点:但醇类对低分子蛋白质、多肽及胞浆内蛋白质保存效果较差,使蛋白变性的作用轻,固定后可再溶解;染色过程中,温育时间长,抗原可流失而减弱反应强度室温固定
15分钟后,将表面液体吹干,入-20℃保存
4. )甲醛(福尔马林)应用最广
优点:形态结构保存好,且穿透性强,
缺点:甲醛放置过久可氧化为甲酸,使溶液pH降低,影响染色;分子间交联形成的网格
结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇,使之不能充分暴露。可造成假阴性的染色结果。室温固定15分钟后,将表面液体吹干,入-20℃保存。

【细胞爬片的组化染色】

1. PBS清洗标本 3次各2 min。

2. 0.5%Triton X-100( DPBS配) 孵育 1次20min。(此步骤用于胞浆、胞核抗原)

3. PBS清洗标本3次各 2 min。

4. 3%H2O2孵育 15 min。

5. 余下步骤同石蜡切片组化染色。

回复:

晶安生物细胞爬片就是让玻片浸在细胞培养基内,细胞在玻片上生长,穿搐扁诽壮赌憋涩铂绩主要用于组织学,免疫组织化学,冰冻切片,细胞涂片,原位杂交等.
单位老师统一订的上海晶安生物的。

回复:

2,取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里,PBS洗三遍,PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小.2%Triton X 100通透10分钟,0,因此夹取的时候要小心,4%多聚甲醛固定20分钟。 3,PBS洗三遍细胞免疫荧光的详细操作步骤 1

回复:

【爬片的准备】 1. 爬片: 24*24盖玻片,刚好用于6孔板。也可用更大的盖玻片,放在大的培养皿中爬片。 2. 盖玻片泡酸过夜,第二天先用自来水冲洗20遍,再置于无水酒清中浸泡6小时,再用三 蒸水冲洗3遍(个人认为主要目的是将酸冲洗干净就可以了...

回复:

细胞免疫荧光的详细操作步骤 1,取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里,PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小,因此夹取的时候要小心。 2,4%多聚甲醛固定20分钟,PBS洗三遍。 3,0.2%Triton X 100通透10分钟,PBS洗三遍。

回复:

细胞爬片就是让细胞(贴壁细胞)在片子(盖玻片)上生长。主要用来做免疫细胞化学啊,原位杂交等吧。在做这些实验时,制作标本有两种,一是离心做细胞涂片,二是细胞爬片。利用贴壁细胞在玻璃等物质上贴壁生长的特点,让它在盖玻片上生长,可以...

回复:

实验室一直用的晶安生物的细胞爬片,国产的。质量不错

回复:

细胞培养板是细胞培养实验中常用和重要的耗材,主要形状有U型和V型、规格也有多重96孔、48孔,24孔,12孔,6孔等,不同的实验需要细胞培养板的规格、形状各不相同,大家是否怎么选择细胞培养板、如何使用细胞培养板、不同的细胞培养板各有什么用...

回复:

有的呀。我们实验室一直用的上海晶安生物的,国产的。质量不错

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